古琴定弦的方法有多种，现在来分别分析:
定弦法一:
使用泛音定弦：
七弦七徽泛音应与四弦九徽泛音等高。
四弦十徽泛音应与六弦九徽泛音等高。
六弦七徽泛音应与三弦九徽泛音等高。
三弦十一徽泛音应与五弦十徽泛音等高。
五弦七徽泛音应与二弦九徽泛音等高。
四弦七徽泛音应与一弦九徽泛音等高。
一弦七徽泛音应与六弦散音等高。
二弦七徽泛音应与七弦散音等高。
定弦法二:
正调（F调）的调弦法。调好以后七条弦从一弦（宫弦）至七弦（武弦）的散音是5、6、1、2、3、5、6 (1=F)。
第一、要准备一个标准音A的音哨（或音*）。
第二、在吹音哨A的同时大指七徽勾五弦（按音），使大七勾五和音哨的发音两音取同高。
第三、现在就可以用泛音调弦了，我们先用名指五徽泛挑七弦，再迅速用食指四徽泛勾五弦，使两弦泛音取同高。因为五弦是和标准音哨A校准过的，所以七弦应以五弦为标准。如七弦不准调七弦（不要再动五弦了）。
第四、现在七弦和五弦都调准了。我们就可以拿七弦来调四弦了。方法是这样的：大指七徽泛挑七弦得音后迅速名指九徽泛勾四弦。使两弦泛音同高。同理七弦已调准，所以两弦不同高时调动四弦。
第五、现在七、五、四三条弦都已调好了。我们拿四弦来调六弦，名指五徽泛挑六，食指四徽泛勾四弦，使两弦同高。同理，四弦已调准，如六弦不准，调六弦。
第六、现在四、五、六、七四弦皆准了。我们就可以拿六弦来调三弦了。大指七徽泛挑六弦得音后迅速名指九徽泛勾三弦，使两弦取同高。如果三弦不准就可以以六弦为基准调三弦了。
第七、大指七徽泛挑五弦得音后迅速名指九徽泛勾二弦。使两弦取同高。如二弦不准就可以以五弦为基准调二弦了。
第八、最后我们拿四弦来调准一弦。方法是：大指七徽泛挑四弦得音后迅速名指九徽泛勾一弦。使两弦同高，以四弦为基准调一弦。
定弦法三:
按音定弦
七弦散音应与四弦九徽按音等高。
六弦散音应与四弦十徽按音等高。
五弦散音应与三弦十徽八分按音等高。
四弦散音应与二弦十徽按音等高。
三弦散音应与一弦十徽按音等高。
二弦七徽按音应与七弦散音等高。
一弦七徽按音应与六弦散音等高。
七弦九徽按音应与五弦七徽按音等高。
六弦十徽按音应与三弦散音等高。
五弦十徽按音应与七弦散音等高。